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培養(yǎng)基配制流程和注意要點

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導(dǎo)讀:配制培養(yǎng)基時要預(yù)先做好準備,首先要依據(jù)培養(yǎng)物和培養(yǎng)目的確定其培養(yǎng)基配方;再根據(jù)培養(yǎng)材料以及實驗處理的多少,確定其培養(yǎng)基的用量;然后準備好所需的用具。

培養(yǎng)基配制程序如下:

1. 將貯存的各種母液按順序依次放好。

2. 將各種潔凈的玻璃器皿如培養(yǎng)瓶、量筒、燒杯、吸管、玻璃棒、漏斗等,放在指定的位置。準備好蒸餾水或無離子水及瓶蓋或封口膜、包紙、橡皮筋等。

3. 稱取規(guī)定量的瓊脂和蔗糖,將瓊脂置于精鋼鍋或者電飯煲中,加水至培養(yǎng)基最終容積的3/4或1/2,隨之加熱使之溶解,注意防止煳鍋底和溢出。瓊脂必須完全溶化,以免造成濃度不均。

瓊脂不能過多,不然會導(dǎo)致培養(yǎng)基太硬,含水太少,通氣不良;反之,培養(yǎng)基太軟,植物材料則難以固定。由于瓊脂較難溶解,所以在制備培養(yǎng)基時,應(yīng)首先加熱溶解。

4. 按母液順序,根據(jù)不同母液的濃縮倍數(shù)移取規(guī)定的量(關(guān)注組培圈微信號:zupeiquan,回復(fù)“1005”查看母液的配制方法和濃縮倍數(shù)),如配制1L MS培養(yǎng)基移取濃縮10倍的大量元素母液為100mL。母液加完后,再經(jīng)過計算加入所需要的植物生長調(diào)節(jié)劑。

在加入母液或生長調(diào)節(jié)劑時,應(yīng)事先檢查這些藥品是否已經(jīng)變色或產(chǎn)生沉淀,若出現(xiàn)這些現(xiàn)象就停止使用。加完后一并倒入已溶化的瓊脂中,并再加入蔗糖。

5. 加蒸餾水定容至培養(yǎng)基的最終容積。

6. pH值調(diào)整。培養(yǎng)基的pH值(酸堿度)直接影響培養(yǎng)物對離子的吸收,所以過酸或過堿都會影響植物的生長。此外,瓊脂培養(yǎng)基的pH值還影響到其凝固程度,所以當培養(yǎng)基配制好以后,應(yīng)隨即進行pH值的調(diào)整(一般pH值為5.6-6.0)。

最好是用酸度計測試,即快又準,如無此設(shè)備也可以用精密pH試紙(應(yīng)在干燥容器中保存,以免吸潮而失效)。若培養(yǎng)基偏酸就用1mol/L的氫氧化鈉來調(diào)節(jié),偏堿則用1mol/L的鹽酸來調(diào)節(jié)。

經(jīng)高壓蒸汽滅菌后,由于某些成分的分解(如蔗糖)或氧化,使培養(yǎng)基的pH值會降低(一般會降低0.2左右)。有時玻璃皿質(zhì)量較差,其中一部分物質(zhì)溶解,也會影響酸度的變化,這些再調(diào)整培養(yǎng)基的pH值的時候都要考慮進去。

一般在比較成熟的情況下,會在培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌前調(diào)高一定的pH值,以便適應(yīng)滅菌后pH值下降的問題,具體調(diào)高多少可根據(jù)自身實驗摸索。

7. 培養(yǎng)基的分裝。瓊脂約在40℃以下時凝固,因此配制好的培養(yǎng)基要趁熱分裝,分裝時一般用燒杯、漏斗直接精選分注。若條件允許,用培養(yǎng)基灌裝機來分注會更加方便(下期將會發(fā)布一篇自制簡易灌裝機的文章,敬請關(guān)注)

分裝時要掌握好分注量,多了即浪費又減小培養(yǎng)物的生長空間;少了又會因營養(yǎng)不足而影響生長,一般以占培養(yǎng)容器1/4 - 1/3左右為宜,培養(yǎng)基在培養(yǎng)容器中的厚度約為1.5cm。

分裝時要注意不要將培養(yǎng)基沾到管壁上,以免引起污染。分裝后立即塞上棉塞或者蓋上瓶蓋或封好封口膜,并在培養(yǎng)瓶上貼標簽或用記號筆在瓶壁上作好標注,然后進行滅菌。

培養(yǎng)基配制流程圖如下:

配制培養(yǎng)基

 


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